CRISPR-Cas9基因组筛选技术可以被用于筛选影响癌细胞增殖、产生耐药性、诱导转移的关键基因。有些基因突变会导致肿瘤细胞对免疫疗法产生抗性,找到肿瘤细胞逃逸免疫疗法的关键基因对于免疫疗法具有十分重要的意义。
研究人员通过超过12万个sgRNA靶向细胞内19050个编码蛋白质的CRISPR高通量基因组进行筛选,将Mel624细胞侵染文库慢病毒。然后进行T细胞杀伤性实验,将存活的肿瘤细胞进行深度测序,通过分析测序数据找出关键基因。
通过对测序结果进行三种不同方法的统计发现,分析出来的潜在关键基因,发现HLA-A,HLA-F,B2M,TAP1和TAP2等基因的突变均出现在筛选出来的肿瘤细胞中。在对APLNR基因功能进行深入研究, 发现在肿瘤细胞中过表达APLNR会导致JAK1含量上升且过表达APLNR蛋白显著提高了肿瘤细胞对于T细胞杀死的抵抗能力,证明APLNR在T细胞肿瘤免疫治疗中具有十分关键的作用。
案例2:CRISPR基因组筛查在发现肿瘤免疫调控新因子中的作用
案例3:通过CRISPR高通量基因组筛选发现肿瘤免疫疗法关键靶基因